Entsyymisidoksinen immunosorbenttimääritys (ELISA) on testi, joka suoritetaan immunologisessa laboratoriossa proteiinipitoisuuksien määrittämiseksi biologisessa näytteessä. ELISA-havaitseminen viittaa testin viimeiseen vaiheeseen, jossa kirkas liuos tai substraatti lisätään muovilevyyn, joka sisältää sitoutunutta entsyymileimattua vasta-ainetta. Entsyymi pilkkoo substraatin ja värin muutos tapahtuu. Lopullisen värillisen liuoksen valon absorbanssi mitataan sitten ELISA -levylukijalla tai spektrofotometrillä.
ELISA -testejä on erityyppisiä, joista kaksi yleisintä ovat epäsuora ELISA ja sieppaus eli kerros -ELISA. Epäsuoraa ELISA: ta käytetään vasta -aineena tunnetun proteiinin havaitsemiseen potilaan seerumista. Esimerkki epäsuorasta ELISA -testistä on ihmisen immuunikatovirus (HIV) -testi, jota käytetään HIV -vasta -aineiden havaitsemiseen. Sandwich -ELISA -testi havaitsee proteiinin tai antigeenin kaappaamalla sen kahden vasta -aineen väliin. Ihmisen koriongonadotropiinin (hCG), joka on kohonnut raskauden aikana, havaitseminen tehdään sandwich -ELISA -testillä.
Molemmissa testeissä on ELISA -tunnistusvaihe määrityksen lopussa. Tämä vaihe sisältää vasta -aineen lisäämisen, johon on kiinnitetty entsyymimolekyyli. Entsyymileimatun vasta-aineen lisäämisen jälkeen lisätään väritön liuos, joka sisältää tälle entsyymille spesifisen substraattimolekyylin. Entsyymi pilkkoo substraattimolekyylin ja liuos muuttaa väriä käytetyn yhdistelmän mukaan. Vasta -aineen tai antigeenin määrä potilasnäytteessä määritetään mittaamalla värinmuutoksen voimakkuus.
ELISA -ilmaisuvaiheessa on käytettävissä useita entsyymisubstraattiyhdistelmiä. Yleisin entsyymi on piparjuuriperoksidaasi (HRP), joka voi halkaista mm. Sekä OPD: n että TMB: n pilkkominen johtaa keltaiseen väriin, ja näiden substraattien optinen tiheys tai valon absorbanssi mitataan ELISA -levylukijalla. OPD: n valon absorbanssi mitataan aallonpituudella 490 nanometriä (nm), kun taas TMB mitataan aallonpituudella 450 nm.
Toinen yleinen entsyymi, jota käytetään ELISA -havaitsemisvaiheessa, on alkalinen fosfataasi. Tätä entsyymiä käytetään substraatin p-nitrofenyylifosfaatin (PNPP) kanssa, ja se tuottaa myös keltaisen liuoksen. PNPP absorboi valoa aallonpituudella 405 nm.
Entsyymisubstraattiyhdistelmien valinta perustuu yleensä siihen, mitä entsyymileimattuja vasta-aineita on kaupallisesti saatavilla, sekä siihen, mitä laitteita käytetään valon absorbanssin mittaamiseen. ELISA -havaitsemiseen käytettävissä olevat monet yhdistelmät tekevät ELISA -testistä erittäin monipuolisen. Se on tärkeä väline sairauksien testaus- ja tutkimuslaboratorioissa.