ELISA -menetelmä on testi, jota käytetään immunologiassa ja muilla tieteellisillä aloilla vasta -aineiden ja antigeenien havaitsemiseksi. ELISA tarkoittaa entsyymiin liittyvää immunosorbenttimääritystä, joka viittaa siihen, että entsyymeihin kytkettyjä vasta-aineita käytetään testitulosten määrittämiseen. ELISA -menetelmää käytetään lääketieteessä sairauksien vasta -aineiden havaitsemiseen diagnostisena toimenpiteenä, ja se on yleinen tekniikka, jota käytetään immunologisessa ja biokemiallisessa tutkimuksessa.
ELISA -testi kehitettiin 1960- ja 1970 -luvuilla korvaamaan immunologiset testit, joissa käytettiin radioaktiivisia vasta -aineita ja antigeenejä. Radioaktiivisten materiaalien käytön riskit tekivät testausprosessista vaikean ja vaarallisen, ja ELISA -menetelmän käyttöönotto ratkaisi molemmat ongelmat. Sen sijaan, että käytettäisiin radioaktiivisia materiaaleja testitulosten määrittämiseen, ELISA käyttää entsyymejä, jotka reagoivat vasta -aineiden kanssa muodostaen värillisiä tuotteita. Värin kehittyminen ELISA -testissä osoittaa positiivisen tuloksen.
ELISA -testejä on useita erilaisia. Yleisimmin käytettyä ELISA-menetelmää kutsutaan epäsuoraksi ELISA-menetelmäksi; tämä on vasta -ainetesti, jota käytetään määrittämään, onko näytteessä tiettyä vasta -ainetyyppiä ja missä pitoisuudessa. Diagnostisessa lääketieteessä tätä testiä käytetään havaitsemaan vasta -aineiden läsnäolo tartuntatauteja, kuten HIV: tä, hepatiittia ja muita vastaan. Näiden sairauksien vasta -aineiden läsnäolo osoittaa, että testattava yksilö on altistunut tartunnanaiheuttajille. Tyypillisesti käytetty näyte on potilaan verta.
Tässä testissä mikrotiitterilevyn päällystämiseen käytetään tiettyä antigeeniproteiinia. Tämä pieni muovilevy sisältää 96 pientä kuoppaa, ja jokaisessa kuopassa voidaan suorittaa yksi ELISA -testi. Tietyssä testissä käytetty antigeeni riippuu testattavan vasta -aineen tyypistä. Jos esimerkiksi ELISA -testiä käytetään HIV -testissä, käytetty antigeeni olisi spesifinen tälle virukselle.
Testin edetessä pieniä määriä tuntematonta näytettä lisätään kuhunkin mikrotiitterilevyn kuoppaan ja levyä inkuboidaan, jotta näytteessä olevien vasta -aineiden sitoutuminen antigeeniin kestää jonkin aikaa. Seuraavaksi levyn kuoppaan lisätään toissijainen havaitsemisvasta -aine. Jos näyte sisältää testattavaa vasta -ainetyyppiä, se sitoutuu sekundaariseen havaitsemisvasta -aineeseen seuraavan inkubointijakson aikana.
ELISA -menetelmän avain on, että toissijainen vasta -aine on leimattu tietyntyyppisellä entsyymillä. Käytetty entsyymi voi muuttaa testinäytteen väriä, kun se reagoi substraatinsa kanssa. Siksi, jos näyte sisältää testattavaa vasta -ainetta, substraatin lisääminen kuoppaan saa sen muuttamaan väriä toissijaisen vasta -aineen ja siihen liittyvän entsyymin läsnäolon vuoksi.
ELISA -menetelmässä on muitakin muunnelmia, mukaan lukien sandwich -ELISA -testi. Tätä käytetään näytteen antigeenien havaitsemiseen vasta -aineiden sijaan. Tässä testissä mikrotiitterilevy päällystetään standardoidulla vasta -ainenäytteellä. Seuraavaksi lisätään antigeenitestinäyte, jota seuraa sekundaarinen havaitsemisvasta -aine ja siihen liittyvä entsyymi. Kuten epäsuora ELISA, värillisen tuotteen muodostuminen osoittaa positiivisen tuloksen.