Marco Polo syntyi 15. syyskuuta 1254 Venetsiassa, Italiassa. Hän syntyi kauppiaiden perheessä ja kasvoi kuullessaan perheen tarinoita matkoista ja seikkailuista. Hänen isänsä ja kaksi veljeä muuttivat vuosikausia ja asuivat ja kävivät kauppaa kaikkialla Mustalta mereltä Egeanmerelle nykypäivän Uzbekistaniin. Tämä kasvatti hänelle kaksi hänen elämänsä suurinta rakkautta: matkustaminen ja kauppa.
Marco Polon isä matkusti ensin kuuluisalla Kiinan silkkitiellä. Pari vuotta alkuperäisen matkan jälkeen Polo liittyi isäänsä toistuvalle matkalle tapaamaan Kublai Khania. Alun perin lyhyeksi vierailuksi suunnitellusta tuli 17 vuoden oleskelu Kiinan keisarikunnassa. Marco tuli Khanin suosikki ja seurasi häntä virallisessa liiketoiminnassa koko valtakunnassa.
Hän palasi Eurooppaan vuonna 1291, missä hän liittyi välittömästi perhekauppaan. Tänä aikana hän myös saneli monia seikkailujaan romantiikkakirjoittajalle Rustichello da Pisalle, joka kirjoitti kirjan Il Milione (The Million), joka myöhemmin käännettiin englanniksi nimellä “The travels of Marco Polo”. Polo tunnistetaan joskus virheellisesti ensimmäisenä länsimaalaisena, joka saavutti Kiinan, mutta hän ei ollut. Itse asiassa monet tutkijat ennen häntä vierailivat Khanin hovissa. Hänestä tekee ikimuistoisen se, että hän asui Kiinassa tarpeeksi kauan oppiakseen sen tavat ja kokeakseen jokapäiväisen elämän omakohtaisesti.
Kun Il Milione julkaistiin, hänestä tuli heti julkkis. Aikana, jolloin Aasia oli hämärän peitossa länsimaissa, kirja oli portaali salaperäiseen ja maagiseen maailmaan. Tämä oli sekä siunaus että kirous miehelle, joka joutui usein kestämään julmia vitsejä paikallisilta, jotka eivät uskoneet kirjan kertomuksia.
Marco Polosta tuli rikas kauppias myöhemmin elämässään, mutta hän ei koskaan poistunut Italiasta omilla retkillään. Hän toimi konsulttina tai sponsorina muille matkailijoille ja auttoi usein muita kauppiaita perustamaan kauppaliiketoimintansa idän kanssa. Hän meni naimisiin myöhään, 46 -vuotiaana, ja hänellä oli kolme tytärtä. Polo kuoli 8. tammikuuta 1324.