Kaikki maastopyöräkilpailut vaativat voimakasta fyysistä kuntoa ja henkistä valmistautumista, mutta mikään ei ole vaativampi kuin 24 tunnin kilpailu. Sarja kilparata on suunniteltu 24 tunnin kilpailulle ja maastopyöräilijät pyrkivät tekemään eniten kierroksia 24 tunnin aikana. Tämä tarkoittaa, että pyöräilijöiden on ajettava polkupyörillään läpi yön valot kiinnitettynä joko kypärään tai ohjaustankoon tai molempiin. 24 tunnin kilpailu tyypillisesti alkaa lauantaina keskipäivällä ja päättyy sunnuntaina keskipäivällä, ja vaikka monet ratsastajat suunnittelevat levähdyspaikkoja-aina kymmenestä minuutista tuntiin tai enemmän-muut kilpailukykyisemmät ratsastajat ajavat pysähtymättä koko 24 tunnin kilpailun ajan, lukuun ottamatta lyhyitä pysähdyksiä vaatteiden tai varusteiden vaihtamiseksi.
Yksi 24 tunnin kilpailun vaativimmista näkökohdista on valmistautuminen. Koska ratsastajan on sitouduttava ajamaan polkupyörällä 24 tuntia, fyysiset vaatimukset keholle ovat suuret ja siksi keho tarvitsee tukea. Paljon ruokaa ja vettä on välttämätöntä. Keho polttaa valtavan määrän kaloreita ja käyttää enemmän vettä kuin keho on tottunut käyttämään 24 tunnin aikana, joten tärkeitä ovat runsaasti hiilihydraatteja sisältävät, helposti sulavat elintarvikkeet sekä runsaasti vettä ja elektrolyyttejä korvaavia juomia.
24 tunnin kilpailu vaatii myös polkupyörää, mikä vaatii useimmissa tapauksissa tukimiehistöä tai ainakin perusteellista mekaanista kykyä pyöräilijän osalta. Koska kilpailu jatkuu 24 tuntia yhtäjaksoisesti, korjaukset on tehtävä nopeasti ja tehokkaasti, jos niitä syntyy. Tukimiehistö auttaa kuljettajaa siirtymään lähtö- ja maalialueella nopeasti ja tehokkaasti, jolloin polkupyörällä ajamiseen jää enemmän aikaa.
Yöllä ratsastajien on varustettava itsensä voimakkailla valoilla ajaakseen pimeitä polkuja. Ne voidaan asentaa kypärään tai pyörän ohjaustankoon. Valot toimivat vahvoilla paristoilla ja niillä on erilaiset käyttöajat, jotka yleensä vaativat useamman kuin yhden valon. 24 tunnin kilpailun valot vaihtelevat suunnittelussa LED -valoista halogeeni- ja muun tyyppisiin valoihin.
24 tunnin kilpailu voidaan suorittaa joko yksin, kun yksi ratsastaja kilpailee itsestään tai joukkueena. Joukkuekategoriat vaihtelevat rodun mukaan, mutta ne ovat usein yhteistyössä ja vaihtelevat duoista 5 ratsastajajoukkueisiin. Vaikka joukkueessa ajaminen helpottaa ratsastajien energian säästämistä, se voi myös johtaa kouristuksiin, kun joukkueen jäsenet odottavat vuoroaan ottaa kierros, sekä henkistä väsymystä ja motivaation heikkenemistä. Tämä 24 tunnin kilpailun osa – joko yksin tai joukkueena – tekee henkisestä uupumuksesta yhtä suuren osan kilpailua kuin fyysinen uupumus.