Mikä on elektroforeettisen liikkuvuuden muutosmääritys?

Määritys on testi, joka on suunniteltu erottamaan solun alkuperäiset osat osiin, jotka on helppo tunnistaa. Elektroforeettinen liikkuvuuden muutosmääritys on koe, joka käyttää sähköä makromolekyylien, kuten proteiinien, siirtämiseen geelimatriisin läpi, jolloin saadaan aikaan ero eri makromolekyylien välillä koon perusteella. Kuten auton akun, negatiiviset ja positiiviset päät ovat elektroforeettisen liikkuvuuden muutostestin tai geelisiirtymämäärityksen vastakkaisilla puolilla. Tämä saa sähkön houkuttelemaan makromolekyylejä varauksen perusteella. Jokainen makromolekyyli liikkuu eri nopeudella, koska pienemmät kokevat vähemmän häiriöitä geelistä.

Useita vaiheita tarvitaan elektroforeettisen liikkuvuuden muutosmäärityksen määrittämiseksi. Ensin on valmistettava erotettavat makromolekyylit. Suurin osa makromolekyyleistä saadaan elävistä soluista ja vaatii erityisiä toimenpiteitä. Erotettavien osien saaminen vaatii usein sentrifugin ja kemiallisen reaktion, joka hajottaa solut. Sentrifugi pyörittää injektiopulloa suurella nopeudella ja muodostaa pelletin tarvittavista makromolekyyleistä. Tämä liuotetaan ja usein lisätään väriä tai muuta etikettiä geelisiirtymämäärityksen seuraamiseksi.

Geelin, jota joskus kutsutaan petiksi, on myös oltava juuri valmistettu jauhemaisen agaroosin ja veden tarkasta seoksesta, joka muuttuu nopeasti nesteestä geeliksi. Yleisesti elektroforeettisessa liikkuvuuden muutosmäärityksessä on useita erillisiä analyysejä varten, joita käytetään eri makromolekyyliseosten vertaamiseen. Yksi kaista on aina asetettu kontrolliksi, ja siinä on yleensä vain yhdenlainen makromolekyyli.

Virtalähde tulee valita huolellisesti, eikä sitä kytketä ennen kuin kaikki on valmis. Virran päälläoloaika määrittää makromolekyylien liikkuvuussiirtymän. On tärkeää erottaa osat toisistaan ​​riittävän tarkasti oikean analyysin kannalta. Jos tehoa ei ole ajoitettu oikein, tulevat vertailut ovat myös epätarkkoja. Makromolekyylien suunta määräytyy sen mukaan, mikä varaus niillä on luonnollisesti – useimmat liikkuvat kohti negatiivista päätä.

Yksinkertaiset geneettiset testit ja proteiinianalyysit tehdään yleensä elektroforeettisella liikkuvuuden muutosmäärityksellä. Tämä näkyy eri vuoroissa eri kaistalla. Jos vuorovaikutusta tapahtuu, makromolekyylit yhdistyvät ja kulkevat hitaammin matriisin läpi verrattuna kontrollikaistaan, jossa on vain yksi makromolekyyli. Geelisiirtymämäärityksiä käytetään nopeasti eliminoimaan tai vahvistamaan geneettisiä tuloksia, joiden monimutkaisten menetelmien toteuttaminen voi kestää kauemmin. He voivat myös määrittää, tarttuvatko vasta-aineet, immuunijärjestelmän makromolekyyli, proteiineihin, joita voidaan käyttää torjumaan bakteereja ja viruksia.