Entsyymiin liittyvä immunosorbenttimääritys (ELISA) on yleinen testi, jota käytetään immunologiassa antigeenien tai vasta-aineiden havaitsemiseksi. Antigeenit aiheuttavat immuunijärjestelmän reaktion – toisin sanoen ne aiheuttavat sairauksia. ELISA: ta käytetään monien bakteeri- ja virusantigeenien, mukaan lukien ihmisen immuunikatovirus (HIV), malaria, kolera, tuhkarokko ja sikotauti, havaitsemiseen. Hieman erilaista ELISA -protokollaa voidaan käyttää vasta -aineiden havaitsemiseen näille ja monille muille patogeeneille. ELISA-protokolla on vaiheittainen menettely tietyn ELISA: n suorittamiseksi.
Vaikka ELISA -protokolla vaihtelee hieman suoritettavan ELISA -tyypin mukaan, peruskäsite on sama kaikille. ELISA riippuu entsyymisidoksisista vasta-aineista, joita kutsutaan myös antiglobuliineiksi. Näihin antiglobuliineihin kiinnitetty signaalimolekyyli saa määrityksen aikana lisätyn substraatin muuttamaan väriä, jos haluttu antigeeni tai vasta -aine on läsnä. Antigeenin tai vasta -aineen määrä on verrannollinen värinmuutoksen määrään, joka voidaan mitata elektronisella levynlukijalla.
ELISAa on kolme päätyyppiä. Suoraa ELISA: ta käytetään yleensä antigeenien havaitsemiseen vasta -aineiden sijaan. Tämä on yksinkertaisin ELISA-protokolla, koska entsyymiin liittyvä vasta-aine sitoutuu suoraan haluttuun antigeeniin. Sitten lisätään substraattia läsnä olevan antigeenin määrän määrittämiseksi.
Vasta -aineiden havaitsemiseen käytetään epäsuoraa ELISA -testiä, kun taas toisen tyyppistä epäsuoraa ELISAa – nimeltään sandwich -ELISA – voidaan käyttää antigeenien havaitsemiseen. Sandwich -ELISA -protokolla vaatii kaksi vasta -ainetta, joita kutsutaan sieppaus- ja havaitsemisvasta -aineiksi, sitoutumaan haluttuun antigeeniin. Lisätään antiglobuliini, joka sitoutuu havaitsemisvasta -aineeseen, ja substraatti lisätään. Epäsuora ELISA noudattaa samanlaista protokollaa, mutta käyttää sieppausantigeeniä sieppausvasta -aineen sijaan halutun vasta -aineen havaitsemiseksi.
Kilpailukykyistä ELISA: ta käytetään usein pieninä pitoisuuksina esiintyvien antigeenien havaitsemiseen, koska se on erittäin herkkä määritys. Toisin kuin muut ELISA-protokollat, kilpailukykyinen ELISA käyttää entsyymiin sitoutunutta antigeenia vasta-aineen sijaan ja hieman erilaista kvantifiointimenetelmää. Siinä näyte, joka sisältää havaittavan antigeenin ja entsyymiin kytketyn antigeenin, lisätään molemmat vasta-aineeseen, ja kaksi antigeenia kilpailevat vasta-ainetta sitovista paikoista. Kun substraattia lisätään, värin muutos on suurempi, kun sitoutuneiden entsyymisidonnaisten antigeenien ja sitoutuneiden näyteantigeenien suhde on suurempi. Tämä tarkoittaa sitä, että suurempi värimuutos havaitaan näytteen antigeenin pienemmillä pitoisuuksilla, mikä tekee tästä menetelmästä niin herkän.