Fluoreskeiini-isotiosyanaattikonjugoitu (FITC) vasta-aine on fluoresoiva molekyylimarkkeri, joka on erittäin spesifinen joko tietylle proteiinille tai primaariselle vasta-aineelle. Niitä käytetään proteiinien tunnistamiseen immunosytokemiassa, entsyymi- ja proteiiniaktiivisuusmäärityksissä, virtaussytometriassa ja Western -blottauksessa. Useimmat FITC -vasta -aineet voidaan ostaa erikoistuneiden molekyylibiologisten yritysten kautta tai yksittäisten tutkimuslaboratorioiden valmistamia.
FITC on fluorokromi, joka on usein konjugoitu tai liitetty vasta -aineeseen spesifisen fluoresoivan markkerin valmistamiseksi. Kun altistetaan sähkömagneettiselle energialle tietyllä aallonpituudella, fluorikromit ovat kemikaaleja, jotka absorboivat energiaa ja emittoivat fotonin tietyllä aallonpituudella. FITC absorboi energiaa 495 nm: ssä ja lähettää fotonin 521 nm: ssä. Jokaisella fluorokromilla on erilainen imeytymis- ja emissioalue, mikä mahdollistaa useiden fluorokromiin liittyvien vasta-aineiden systemaattisen havaitsemisen yhdessä kudos- tai näytekappaleessa. Tämä on samanlainen kuin solun eri osien merkitseminen eri väreillä ja sitten erikoislasien käyttäminen vain yhden värin katsomiseen.
Vasta -aineet voidaan kytkeä tai konjugoida FITC -molekyyliin FITC -vasta -aineen tuottamiseksi. Tätä FITC -vasta -ainetta voidaan käyttää proteiinin leimaamiseen suoraan tai epäsuorasti. Kun FITC -vasta -aine merkitsee suoraan proteiinin, se toimii ensisijaisena vasta -aineena tai vasta -aineena, joka on suorassa kosketuksessa antigeenin kanssa. FITC -vasta -aineen välillinen käyttö tapahtuu, kun sitä käytetään toissijaisena vasta -aineena, joka sitoutuu spesifisesti primaariseen vasta -aineeseen. Kun FITC -konjugoitua vasta -ainetta käytetään suoraan, leimausprosessi kestää vähemmän aikaa, mutta leimaus ei ole yhtä vahva. Epäsuora leimaaminen vie lisävaiheen, mutta signaali tai leima vahvistetaan, koska useat FITC-merkityt sekundaariset vasta-aineet voivat kiinnittyä yhteen primaariseen vasta-aineeseen.
FITC -vasta -aineelle on monia käyttötarkoituksia solu- ja molekyylibiologiassa. Tämäntyyppistä vasta -ainetta voidaan käyttää yksinään tai yhdessä muiden monoklonaalisten tai polyklonaalisten vasta -aineiden kanssa spesifisten proteiinien leimaamiseksi soluissa tekniikalla, joka tunnetaan immunosytokemiana. FITC -vasta -aineita voidaan käyttää myös sellaisissa tekniikoissa kuin entsyymi- ja proteiiniaktiivisuusmääritykset, virtaussytometria ja Western -blottaus.
FITC -konjugoidut primaariset ja sekundaariset vasta -aineet ovat laajalti saatavilla monien molekyylibiologisten yritysten kautta. Laboratoriot voivat myös valmistaa omia primaarisia vasta -aineitaan ja käyttää sitten sarjaa FITC: n konjugoimiseksi niihin. Jotkut yritykset ottavat laboratoriossa valmistettuja primaarisia vasta-aineita ja konjugoivat ne FITC-fluorokromiin laboratoriota varten. FITC-konjugoituja sekundaarisia vasta-aineita ei yleensä valmisteta yksittäisissä tutkimuslaboratorioissa, ja ne ostetaan yleensä yrityksiltä, jotka ovat erikoistuneet toissijaisten vasta-aineiden tuotantoon.