Geenikirjasto on termi deoksiribonukleiinihappo (DNA) -fragmenttien kokoelmille, jotka on kloonattu satunnaisesti organismien genomeista. Ne kloonataan plasmideiksi, jotka voivat replikoitua erillään kromosomeistaan ja faageistaan, jotka ovat loistartunta, joka ruokkii bakteereja. Kun kloonataan plasmideina, kokoelma koostuu isäntäsoluista ja jokainen solu sisältää DNA -fragmentin. Faagigeenikirjastot koostuvat niin kutsutuista faagilysaateista, jotka ovat tuhoutuneiden solujen jäännöksiä, joihin on lisätty DNA -fragmentti. Kun geenikirjastot sisältävät kokoelman kaikista organismin geneettisistä tiedoista, niitä pidetään edustavina geenikirjastoina.
Lisäksi kirjastot voivat käyttää solun rekombinanttinukleiinihappoa (RNA) materiaalin kiinnittämiseen, ja tämä isäntäsolukokoelma yhdistelmävektorien kanssa tunnetaan cRNA -geenikirjastona. Geenikirjaston seulonta löytää tietyt solut, jotka sisältävät kloonausvektoreita tietyn geenin kanssa, jota etsitään geenikirjastosta, ja käyttää sitten yhtä monista tekniikoista niiden eristämiseksi ja keräämiseksi. Kerätyn solun katsotaan kloonatun. Jotta meillä olisi kohtuullinen mahdollisuus eristää ja kloonata tietty geeni, käytetään yleensä vain edustavia geenikirjastoja, koska jokainen geeni ja tietyn genomin jokainen alkuperäinen DNA -fragmentti kerätään siihen. Jotta saavutettaisiin 99% mahdollisuus löytää tietty ihmisen geeni kloonausta varten, yli 600,000 XNUMX kloonattua solua olisi seulottava halutun geenin löytämiseksi edustavasta geenikirjastosta.
DNA uutetaan organismista geenikirjaston aloittamiseksi. Kirjasto on rakennettu järjestämään DNA ja sen tuhannet erilaiset geenit. Kirjastosta tulee kokoelma kymmeniä tuhansia bakteeripesäkkeitä, joista jokainen on moduloitu organismin DNA -fragmentilla, joka sisältää erityisen kiinnostavan geenin. Kirjastot sisältävät myös restriktioentsyymejä ja plasmidin. Restriktioentsyymejä käytetään DNA: n nukleotiditietojen lukemiseen, ja niitä käytetään leikkaamaan DNA fragmentteiksi erottamalla nukleotidit toisistaan.
Samat restriktioentsyymit leikkaavat bakteeriplasmidit ja fragmentit ja plasmidit yhdistetään koeputkessa yhdistettäväksi, jolloin saadaan uusi yhdistelmä. Nämä yhdistelmäplasmidit palautetaan sitten takaisin bakteeriviljelmään joko lämpöshokilla tai elektroporaatiolla. Nämä vaiheet suoritetaan yhä uudelleen, kunnes koko geenikirjasto on muodostettu tietylle genomielimelle kaikista alkuperäisen DNA -uutteen fragmentista.