Guadalupen neitsyt, jota joskus kutsutaan myös Guadalupen neitsytksi, on Neitsyt Marian kuva, jonka sanotaan ilmestyneen ihmeellisesti 12. joulukuuta 1531 Meksikon talonpojan Juan Diegon viittaan. Vaikka kuvan aitoudesta on jonkin verran keskustelua ja kiistaa ihmeenä eikä pelkästään taideteoksena, monille katolilaisille ja meksikolaisille kuva on pyhä ja kunnioitettu Meksikon yhdistävänä kuvana. Viitta, jolla Guadalupen neitsyt on, on edelleen Guadalupen basilikassa, joka on rakennettu paikkaan, jossa ihmeen sanotaan tapahtuneen.
Vaikka viitta on tutkittu laajasti, Guadalupe -neitsyt -kuvan luonteesta ja alkuperästä on ristiriitaisia raportteja. Jotkut tutkijat ovat ilmoittaneet, etteivät he pystyneet tunnistamaan kuvan luomiseen käytettyjä materiaalityyppejä, samoin kuin näkemään kuvassa muita ihmeellisiä tai selittämättömiä ominaisuuksia. Muut tutkijat ovat kuitenkin todenneet, että kuva ja materiaalit, joista se on tehty, ovat selvästi maanpäällisiä eivätkä ihmeellisiä. Nämä tutkijat havaitsivat, että käytetyt materiaalit ja tekniikat olivat yhdenmukaisia 16 -luvun taiteilijoiden yleisesti käyttämän kanssa.
Virallisessa katolisessa muistiinpanossa Guadalupen Neitsyt -kuvan luomisesta todetaan, että Juan Diego oli kävelemässä kotoaan Mexico Cityyn ja ollut Tepeyacin kukkulalla, kun hän näki nuoren noin 15-16 -vuotiaan tytön. Tyttö puhui hänelle äidinkielellään ja pyysi häntä rakentamaan kirkon tuohon paikkaan hänen kunniakseen. Diego totesi, että hänen sanoistaan hän ymmärsi olevansa Neitsyt Marian ilmestys. Katolilaisuudessa ja muissa kristinuskon muodoissa Neitsyt Mariaa pidetään perinteisesti Jeesuksen Kristuksen äitinä.
Kuultuaan näyn sanat Diego meni tuolloin espanjalaisen piispan luo ja kertoi hänelle tapahtuneesta. Piispa pyysi Diegoa palaamaan paikalle ja pyytämään ilmestykseltä ihmettä todistaakseen hänen jumalallisuuden väitteensä. Diego palasi ja löysi jälleen Maria -näyn, ja sitten hän käski hänen kerätä kukkia piispaa varten, vaikka oli talvi ja kukat eivät kukkineet. Diego teki kuten käskettiin ja löysi ruusuja, jotka olivat kotoisin piispan kodista, mutta eivät siltä alueelta, ja toimitti ne piispalle. Palatessaan kukkien kanssa Diego ja piispa hämmästyivät havaitessaan, että Guadalupen Neitsyt -kuva oli ihmeellisesti ilmestynyt Diegon viittaan.
Itse kuva on nuori nainen, joka on pukeutunut siniseen viittaan, yllään viitta alla, pää kumartunut ja kädet yhdessä kuin rukouksessa. Koko kuvaan on integroitu erilaisia symboleja, joiden on väitetty olevan sekä vertauskuvallisia Raamatun apokalyptisille kuville että edustavat Immaculate Conceptionia, joka on ajatus Jeesuksen Kristuksen käsityksestä neitsyt äidille. Kuvan luonteesta tai sen tarkasta kuvasta riippumatta Guadalupen Neitsyttä on käytetty Meksikon yhtenäisyyden symbolina vuosisatojen ajan. Kuvaa käytti Miguel Hidalgo Meksikon vapaussodan aikana sekä Emiliano Zapata Meksikon vallankumouksen aikana.