Northern blot -hybridisaatio on tekniikka, jota käytetään näytteen lähetti -RNA (mRNA) -tasojen havaitsemiseen ja läsnä olevan mRNA: n määrän määrittämiseen. Vaikka muita tehokkaampia tekniikoita on olemassa, Northern blot on edelleen yksinkertainen ja helppokäyttöinen. Northern blotting -tekniikka mahdollistaa myös useiden näytteiden suoran vertailun yhdessä kokeessa.
Messenger -RNA on eräänlainen nukleiinihappo, joka muodostuu, kun geeniä ekspressoidaan. Geeni, joka on kytketty päälle ja toimii solussa, transkriptoidaan mRNA: ksi. Sitten mRNA kuljetetaan solun sytoplasmaan, missä se muunnetaan proteiiniksi. Solun mRNA -näytteen Northern blot -analyysi voi siten tarjota hyödyllistä tietoa solun tuottamasta proteiiniryhmästä.
Northern blot -menetelmässä mRNA uutetaan soluista ja ajetaan denaturoivan agaroosigeelielektroforeesin läpi, mikä mahdollistaa näytteen mRNA: n erottamisen koon mukaan. Näytteet tunnetuista mRNA -molekyyleistä ajetaan samanaikaisesti kontrollin aikaansaamiseksi. Kun elektroforeesi on valmis, näytteet siirretään ja immobilisoidaan kiinteälle kalvolle, joka on tyypillisesti valmistettu materiaalista, kuten nailonista. Näytteet altistetaan sitten radioleimattuihin koettimiin useita tunteja ennen analysointia. Analyysin aikana radioleimatulle koettimelle hybridisoitunut mRNA voidaan havaita selvästi röntgensäteellä.
Northern blotting -tekniikka mahdollistaa geeniekspressiomallien havaitsemisen eri kudostyyppien välillä. Eri kudosten ja elintyyppien soluista uutettua Messenger -RNA: ta voidaan verrata ja soluvasteita stressiin, infektioihin ja moniin muihin ärsykkeisiin voidaan tutkia. Tarkastelemalla eroja mRNA: n ekspressiossa eri olosuhteissa tiedemies voi määrittää, millaisia proteiineja solu tuottaa vasteena tietyille ärsykkeille. Tämä voi antaa vihjeitä tuntemattomien proteiinien toiminnoista tai tunnettujen proteiinien tapauksessa tietoa soluvasteista kyseisiin ärsykkeisiin.
Esimerkiksi Northern blot voi osoittaa, että tuntemattoman proteiinin ilmentyminen lisääntyy vasteena tietyn toksiinin läsnäololle. Voitaisiin sitten teorioida, että proteiini osallistuu myrkyllisyyden vähentämiseen, mahdollisesti kuljettamalla kemikaali pois solusta tai muuttamalla se metaboliitiksi. Jos tunnettuja proteiineja tutkitaan, proteiiniekspression muutosten dokumentointi voi antaa tietoa itse vasteesta. Jos esimerkiksi tunnetun molekyylikuljettajan ekspressio lisääntyisi, voitaisiin vahvistaa, että soluvaste toksiinille on kuljettaa toksiini ulos solusta.