Ribonukleiinihapon (RNA) uuttaminen on laboratorioprosessi, jota käytetään yleisesti molekyylibiologisessa tutkimuksessa. Eristämällä RNA -säikeitä tutkijat voivat tutkia eri organismien geneettisiä komponentteja bakteereista ihmisiin. Vaikka deoksiribonukleiinihappo (DNA) on yleisin geneettiseen tutkimukseen liittyvä nukleiinihappo, RNA on yhteys DNA: n ja soluproteiinien välillä, jotka vastaavat monista rakenteellisista rooleista. RNA: n uuttamisen avulla tutkijat voivat tutkia polkua DNA -tiedosta proteiinin tuotantoon ja solutoimintaan.
Nukleiinihapot, DNA: n ja RNA: n muodossa, sisältävät geneettistä tietoa, joka tarvitaan solujen toimintaan ja replikoitumiseen. Ribonukleiinihappo tai RNA on linkki DNA: n ja soluproteiinien välillä. Tietyt RNA -tyypit kopioivat tiettyjä DNA -osia tällaisten proteiinien muodostumisen helpottamiseksi. DNA: n ja soluproteiinien välisen polun seuraaminen auttaa tutkijoita ymmärtämään geenisäätelyä ja proteiinisynteesiä yksittäisissä soluissa. Prosessit, jotka helpottavat RNA: n erottamista ja varmistavat näytteen vakauden, tarjoavat tutkijoille keinon seurata polkua DNA: n ja RNA: n välillä.
RNA -uuton aikana biologisia näytteitä vähennetään ja puhdistetaan siinä määrin, että RNA eristetään myöhempää tutkimista varten. Molekyylikomponentit, kuten proteiinit, RNA ja DNA, jakautuvat tai eristyvät eri aikoina, mikä mahdollistaa tiettyjen RNA -tyyppien erottamisen. Eri kudos- ja solutyypit vaativat erilaisia RNA -uuttomenetelmiä. Vaikka RNA -uuton suorittamiseen on olemassa erilaisia menetelmiä, yleisimmin käytetään sentrifugointia biologisten näytteiden sekoittamiseksi erilaisten kemiallisten yhdisteiden kanssa, jotka tunnetaan yhdessä denaturointiaineina.
Yksi yleinen menetelmä RNA-uuttamiseksi on fenoli-kloroformiuutto, joka tunnetaan myös nimellä PC tai PCIA. Tätä menetelmää käyttäen kudosnäytteet sekoitetaan yhtä suuriin osiin fenolia ja kloroformia. Kaksivaiheisena seoksena tunnettu liuos sentrifugoidaan denaturoivassa liuoksessa. Tuloksena on kaksi faasia, joista ensimmäinen on vesifaasi ja toinen orgaaninen faasi. RNA -uutto tapahtuu vesifaasin aikana etanolisaostuksen avulla.
Muut menetelmät RNA: n erottamiseksi vaihtelevat näytteen koon, kudostyypin ja sen mukaan, vaaditaanko täydellistä vai osittaista RNA: ta. Hiiva-, kasvi- tai eläinnäytteitä, täydellistä RNA: ta tai kokonais -eukaryoottista RNA: ta varten tarvitaan näytteitä. Bakteerit sitä vastoin vaativat täydellisen prokaryoottisen RNA: n. Jokainen RNA -tyyppi vaatii erilaisen menetelmän näytteen valmistamiseksi, uuttamiseksi ja varastoimiseksi.
RNA -uuton komplikaatiot ovat yleisiä ja liittyvät yleensä RNA: n hajoamiseen uuton jälkeen. Kudosnäytteissä yleisesti esiintyvät ribonukleaasientsyymit hajottavat nopeasti RNA: ta. Jos sitä ei käytetä nopeasti, RNA: n hajoaminen voi tehdä näytteestä hyödyttömän. Vastauksena monet RNA: n uuttomenetelmät sisältävät vaiheita näytteiden valmistamiseksi säilytettäväksi sekä ennen uuttoa että sen jälkeen RNA: n hajoamisen vähentämiseksi tai hidastamiseksi.