Mikä on seerumin ELISA?

Seerumin entsyymiin liittyvä immunosorbenttimääritys (seerumin ELISA) on menetelmä, jota käytetään biologisen aineen määrän määrittämiseen seeruminäytteessä luottaen antigeenin ja vasta-aineen erityiseen vuorovaikutukseen. Esimerkkejä kiinnostavista biologisista aineista ovat vasta -aine, joka on tuotettu vastauksena virusinfektioon, kuten vasta -aine ihmisen immuunikatovirusta (HIV) vastaan, tai raskautta osoittava hormoni, kuten ihmisen koriongonadotropiini (hCG), tai autoimmuunisairaus nivelreumassa tuotettu vasta -aine, kuten nivelreuma. Yleensä on olemassa suora määritys, jossa käytetään spesifistä vasta -ainetta antigeenin läsnäolon havaitsemiseksi seeruminäytteessä, ja epäsuora määritys, jossa käytetään antigeenia vasta -aineiden läsnäolon määrittämiseksi seeruminäytteessä.

Suorassa seerumin ELISA: ssa näyte, joka sisältää tuntemattoman määrän antigeeniä, kiinnitetään liikkumattomaan pintaan, kuten reaktioputkeen tai mikrotiitterilevyyn, ja sitä inkuboidaan tietyn vasta -aineen kanssa, joka on kemiallisesti kytketty entsyymiin. Sitä vastoin epäsuorassa seerumin ELISA: ssa tunnettu antigeeni kiinnitetään liikkumattomalle pinnalle ja sitä inkuboidaan sen seeruminäytteen kanssa, joka sisältää tuntematonta määrää vasta -ainetta. Seeruminäytteen antigeenispesifisen vasta-aineen odotetaan sitoutuvan tiukasti immobilisoituun antigeeniin, kun taas epäspesifiset vasta-aineet poistetaan seuraavissa pesuvaiheissa. Yleensä liikkumatonta pintaa käsitellään toisella vasta -aineella, joka tunnistaa kaikkien vasta -aineiden muuttumattoman alueen ja joka on kemiallisesti kytketty entsyymiin. Sekä suorassa että epäsuorassa ELISA: ssa viimeinen vaihe koostuu entsyymispesifisen substraatin lisäämisestä, reaktion käynnistämisestä, joka tuottaa mitattavissa olevan signaalin, joka on suoraan verrannollinen seeruminäytteessä olevan antigeenin tai vasta-aineen määrään.

Seerumin ELISA on laajalti käytetty testi useista syistä. Mikä tärkeintä, sitä pidetään luotettavana kliinisenä testinä antigeeni-vasta-aine-vuorovaikutuksen spesifisyyden vuoksi, ja tämän määrityksen herkkyys mahdollistaa biologisten aineiden havaitsemisen erittäin pieninä pitoisuuksina seerumista. Se on suunniteltu suuren määrän näytteiden samanaikaiseen arviointiin, ja siksi sitä käytetään usein laajamittaisissa operaatioissa, kuten verenluovutusnäytteiden seulonnassa HIV-vasta-aineiden havaitsemiseksi. Lisäksi ELISA -sarjoja, jotka mittaavat yleisesti määritettyjä vasta -aineita ja antigeenejä, on kaupallisesti saatavilla käytettäväksi kliinisissä tai tutkimusympäristöissä, ja ne sisältävät kätevästi kaikki tarvittavat reagenssit koko kokeen suorittamiseksi.

Kasvava tutkimusalue sisältää seerumin ELISA -tekniikan soveltamisen sytokiinien havaitsemiseen. Sytokiinit ovat immuunijärjestelmän erittämiä liukoisia proteiinimolekyylejä, jotka osallistuvat usein tulehdusprosesseihin; sytokiinitasot ovat siksi informatiivisia kroonisiin tulehduksiin liittyvistä sairaustiloista, kuten sydänsairauksista, autoimmuunisairauksista ja ruoansulatuskanavan sairauksista. Uskotaan, että sytokiinitasojen arvioinnilla voidaan erottaa tulehdukselliset suolistosairaudet, kuten Crohnin tauti ja haavainen paksusuolitulehdus, ja se voi lopulta pystyä ennustamaan sydänsairauksien ja nivelreuman lopputuloksen.