Miten bakteerien endotoksiinien testaus toimii?

Bakteerien endotoksiinitestissä käytetään tyypillisesti reagensseja, jotka sekoitettuna liuokseen mahdollisen epäpuhtauden kanssa aiheuttavat reaktion, mikä osoittaa endotoksiinin läsnäolon. Kromogeeninen testaus, geelihyytymitesti ja turbidimetrinen testaus ovat menetelmiä, joita tiedemiehet käyttävät yleisesti bakteerien endotoksiinitestissä. Teknikot käyttävät näitä arviointimenetelmiä eri aineisiin ja esineisiin endotoksiinikontaminaation tarkistamisessa. Veden, lääkkeiden, laitteiden ja pakkausten valmistuksessa käytettävien raaka -aineiden on täytettävä kaikki endotoksiinistandardit.

Kaikilla bakteereilla, sienillä ja viruksilla on suojaavat ulkokalvot, jotka koostuvat lipopolysakkarideista, joita kutsutaan myös nimellä LPS. Näiden ketjujen lipidiosa sisältää endotoksiineja. Nämä aineet pysyvät yleensä kalvon sisällä, mutta vapautuvat solujakautumisprosessin aikana ja solujen tuhoutumisen tai hajoamisen aikana. Ihmisillä nämä aineet aiheuttavat kuumetta, epänormaalia hyytymistä, septistä sokkia ja muita oireita, vaikka toisin kuin solun sisällä olevat eksotoksiinit, endotoksiinit eivät muutu toksoidiksi. Yleensä mikrobiologit tarkistavat endotoksiinien läsnäolon, jotka liittyvät erilaisiin gram-negatiivisiin bakteereihin, mukaan lukien E. coli.

Geelitulppa-testi tai Limulus ameboecyte lysaatti (LAL) -määritys sisältää kalvon tuhoavan kemikaalin, joka on peräisin hevosenkengänrapun amebosyyteistä, jota kutsutaan myös nimellä Limulus polyphemus. Teknikot havaitsevat positiivisen indikaation endotoksiineista, jos hyytymistä tai geeliytymistä tapahtuu, kun lysaatti altistuu kyseiselle esineelle tai aineelle. Mikrobiologit käyttävät tyypillisesti tätä bakteerien endotoksiinitestimenetelmää yhdessä kromogeenisen ja samean mittauksen kanssa lopullisten tulosten saamiseksi.

Kromogeenisen bakteerin endotoksiinitestissä käytetään erikoiskäsiteltyä LAL: a. Kun tämä lysaatti koskettaa endotoksiinia, reaktio tuottaa tietyn värin. Lopullinen testausprosessi sisältää liuoksen sameuden tai sameuden mittaamisen. Teknikot altistavat geelihyytymitestissä muodostuneen liuoksen spektrofotometrille, joka lähettää valonsäteen. Mittaamalla valon voimakkuuden häviön säteessä liuoksen läpi, mikrobiologit voivat määrittää, onko endotoksiinia läsnä.

Lab -yhteistyökumppanit suorittavat yleensä nämä kolme bakteerien endotoksiinitestiä kaksi tai kolme kertaa tarkkojen tulosten varmistamiseksi. Geelitestiä ei käytetä yksinomaan, koska sen alin havaitsemisraja on 0.03 Ehrlich -yksikköä millilitraa kohti (EU/ml). Kromogeeniset ja turbidimetriset testit havaitsevat endotoksiinit alueella 0.005 EU/ml. Turvallisuusparametrit vaihtelevat suuresti testattavan aineen mukaan. Injektioon tai kasteluun käytettävä steriili vesi voi sisältää enintään 0.25 EU/ml, mutta inhalaatiotarkoituksiin tarkoitettu steriili vesi voi sisältää enintään 0.5 EU/ml.