Nikotiini voidaan havaita erilaisilla testeillä, jotka mittaavat kotiniiniksi kutsutun kemikaalin tasoa. Keho tuottaa kotiniinia vain, kun nikotiinia pääsee kehoon, esimerkiksi savukkeiden, piipputupakan, nuuskan, sikarien tai purutupakan avulla. Kotiniini voidaan havaita testaamalla henkilön verta, hiuksia, sylkeä tai virtsaa. Testien tulokset voivat osoittaa, onko henkilö nykyinen tupakan käyttäjä vai entinen käyttäjä.
Nikotiinitestin suorittamiseen voi olla useita syitä. Vanhemmat käyttävät joskus testejä selvittääkseen, ovatko heidän lapsensa tupakoineet. Joidenkin yritysten sairausvakuutuspalvelujen tarjoajat vaativat nikotiinitestin mahdollisen työntekijän terveysriskien arvioimiseksi. Testausta voidaan käyttää myös tupakoinnin lopettamisohjelmissa, lasten huoltajuustapauksissa, kun henkilö hakee henkivakuutusta tai tutkimustarkoituksiin.
Virtsatesti on yleisesti käytetty menetelmä nikotiinitestissä. Kotiniinipitoisuus virtsassa mitataan käyttämällä testiliuskaa tai asettamalla muutama tippa virtsaa testilevylle. Kotiniinia sisältävä virtsa reagoi testimateriaalien kanssa saadakseen positiivisen tai negatiivisen tuloksen. Huumeiden testaussarjat ovat helposti saatavilla apteekeissa tai Internetissä niille, jotka haluavat suorittaa nikotiinitestin yksityisesti. Nikotiinivirtsatesti on voimassa noin neljä päivää sen jälkeen, kun henkilö on viimeksi käyttänyt tupakkaa.
Syljen arviointi nikotiinitestille on samanlainen prosessi kuin virtsatesti. Tätä arviointia varten syljenäyte asetetaan koeliuskaan ja tuottaa tuloksia noin puolessa tunnissa. Vaikka nikotiinin sylkitesti antaa johdonmukaisia ja tarkkoja tuloksia, se voi näyttää positiivisen tuloksen altistumisesta käytetylle savulle. Vanhemmat käyttävät joskus syljen kotitestipakkauksia selvittääkseen, ovatko heidän lapsensa tupakoineet.
Nikotiinitestien verianalyysi ei ole yhtä luotettava kuin virtsa- tai sylkitestit. Kun henkilö käyttää tupakkaa, veren nikotiinipitoisuus nousee lähes välittömästi ja pysyy läsnä yli kaksi viikkoa. Veren nikotiinipitoisuus voi vaihdella yksilön aineenvaihdunnan, käytetyn tupakan tyypin ja savun syvyyden mukaan. Jotkut työnantajat haluavat verikokeita, koska he voivat tarkistaa nikotiinin ja laittomat huumeet samanaikaisesti.
Kotiniini voi pysyä karvatupissa jopa vuoden ajan tupakan käytön lopettamisen jälkeen. Nikotiinitestit hiusnäytteillä ovat kalliita, ja vakuutusyhtiöt tai työnantajat käyttävät niitä harvoin. Se rajoittuu yleensä tutkimukseen, jossa mitataan käytetyn tupakan vaikutuksia tupakoimattomiin. Hiukset mistä tahansa kehon osasta soveltuvat tämän tyyppiseen testiin.