Henkivakuutus- tai sairausvakuutushakemukset sisältävät usein nikotiinin havaitsemistestin. Kaasun nestekromatografialla voidaan havaita nikotiini – tai sen ensisijainen metaboliitti, kotiniini – virtsasta, verestä, syljestä ja hiusnäytteistä. Kotiniinin mittaamista virtsassa pidetään herkimpänä nikotiinin havaitsemismenetelmänä. Mikään näistä testeistä ei erota täydellisesti aktiivisia tupakoitsijoita, passiivisia tai käytettyjä tupakoitsijoita ja tupakoimattomia, koska yksilölliset erot nikotiinin aineenvaihdunnassa vaihtelevat suuresti. Nikotiinin havaitsemistestaus antaa kuitenkin hyvän arvion nikotiinin kokonaisaltistuksesta.
Nikotiini on riippuvuutta aiheuttava kemikaali, jota löytyy savukkeista ja purutupakasta. Tupakan pureskelu tai hengittäminen tuo nikotiinia elimistöön, missä se metaboloituu maksassa ja erittyy virtsaan. Nikotiinin ensisijainen metaboliitti on kotiniini, ja kotiniini on ensisijainen nikotiinin havaitsemismenetelmä, koska sen puoliintumisaika on jopa 10 kertaa niin pitkä kuin nikotiini. Toisin sanoen se on vakaa kehossa paljon kauemmin. Tapauksissa, joissa epäillään nikotiinin yliannostusta, kuten silloin, kun lapsi syö nikotiinikumia, mitataan nikotiinia kotiniinin sijasta.
Nikotiinin havaitseminen hiusnäytteiden avulla on harvinaista kokeellisten testien ulkopuolella, koska se on kallista. Hiusten testaus voi kuitenkin arvioida tupakan pitkäaikaista käyttöä, koska se voi havaita nikotiinialtistuksen jopa 10 päivää ennen näytteenottoa. Syljen nikotiinitestit ovat yksinkertaisia ja ei-invasiivisia; sylki imeytyy suusta käyttämällä näytekangasta tai vanupuikkoa, mutta riittävän suuren näytteen ottaminen voi olla vaikeaa. Lapset tai aikuiset, joilla on kuiva suu, eivät välttämättä tuota riittävästi sylkeä testinäytteelle. Sylkätestit perustuvat myös viimeaikaiseen nikotiinialtistukseen eivätkä välttämättä erota kevyesti aktiivisia tupakoitsijoita passiivisista tupakoitsijoista.
Verinäytteet mahdollistavat kotiniinin havaitsemisen veriplasmasta, vaikka verinäyte vaatii paljon enemmän käsittelyä kuin virtsa- tai syljenäytteet. Verinäyte sentrifugoidaan ensin verisolujen erottamiseksi plasmasta ja raskaat proteiinit saostetaan sitten ulos. Koeputki sentrifugoidaan toisen kerran ja asetetaan sitten höyrystimeen jäljelle jääneen nesteen poistamiseksi; kuivat proteiinit, mukaan lukien kotiniini, liuotetaan käyttäen metyylialkoholia. Vielä kerran koeputki sentrifugoidaan erottamaan jäljellä olevat raskaat proteiinit, ja neste kaadetaan pois ja käytetään analyysiin. Tämä prosessi on aikaa vievä ja kalliimpi kuin virtsa- tai sylkitestit.
Nikotiinin havaitseminen virtsan avulla on erittäin herkkää ja havaitsee pienetkin tupakansavut. Se on yleisin menetelmä, jota vakuutusyhtiöt käyttävät erottaakseen aktiiviset tupakoitsijat passiivisista tupakoitsijoista. Olipa nikotiinin havaitseminen virtsan, syljen tai veriseerumin kautta, ero voidaan nähdä niiden ihmisten välillä, jotka polttavat aktiivisesti kolme tai useampia savukkeita päivässä, ja niiden ihmisten välillä, joilla on paljon käytettyä savua. Raskaat tupakoitsijat voidaan myös erottaa kevyistä tupakoijista näytteen kotiniinimäärän mukaan.