Biokemiassa termiä pyrofosfaatti (PPi) käytetään viittaamaan kemiallisiin yhdisteisiin, jotka käsittävät pyrofosforihapon esterit, suolat ja anionit. Jälkimmäinen, joka on negatiivisesti varautunut vedetön fosfaatin happo, muuttuu reaktiiviseksi kuumennettaessa. Vedessä suspendoituna pyrofosforihapon anioni kuitenkin myös helposti laukaisee vesimolekyylien jakautumisen vety- ja hydroksidi -ioneiksi pyrofosforolyysiksi kutsutussa prosessissa, joka tuottaa epäorgaanista fosfaattia. Tämä tarkoittaa erityisesti solun adenosiinitrifosfaatin (ATP) muuttamista adenosiinimonofosfaatiksi (AMP).
Energiakuorman vaihtelut fosforylaatioreaktioissa proteiinien ja muiden orgaanisten molekyylien kanssa tuottavat erilaisia pyrofosfaatin muotoja. Lopputulos sisältää kuitenkin aina yhden näistä ioneista. Esimerkiksi farnesyylipyrofosfaatti saadaan synteesillä hiilivetyjä, jotka tunnetaan terpeeneinä. Dimetyyliallyylipyrofosfaatti on mevalonihapon sivutuote.
Vaikka nämä yhdisteet ovat välttämättömiä solujen normaalille toiminnalle lähes kaikissa elävissä organismeissa, niillä on myös tärkeä rooli teollisessa kemiassa. Esimerkiksi dinatriumpyrofosfaattia käytetään nahan käsittelyssä estämään hapettumista, joka voi johtaa rautaoksidien värjäytymiseen. Sitä käytetään myös parantamaan sementin ja öljyn juoksevuutta, kun niitä lisätään pehmittimeksi. Tätä ainetta lisätään myös hapatettuihin leivonnaisiin sekä liha- ja äyriäissäilykkeisiin kelatoivana aineena säilöntäliuoksen pH: n säätämiseksi.
Natriumpyrofosfaatilla on monia sovelluksia elintarviketeollisuudessa kelatoivana ja sakeuttavana aineena. Yhdessä maissitärkkelyksen kanssa se on Bakewell -leivinjauheen ensisijainen ainesosa, joka sai mainetta toisen maailmansodan aikana, kun tavallinen leivinjauhe tuli vähiin. Tätä jauhetta myydään edelleen gluteenittomana vaihtoehtona leivinjauheelle ja hammaskiville. Se on myös yleinen elintarvikelisäaine, jota löytyy pakastetuista elintarvikkeista, valmiista vanukkaista ja joistakin soijapohjaisista tuotteista.
Tämä jauhe on käyttökelpoinen myös dispergointiaineena ja hapettumisenestoaineena. Itse asiassa sitä käytettiin kerran yleisesti pyykinpesuaineissa tahrojen poistamiseksi ja estämiseksi. Tämä käytäntö lopetettiin suurelta osin 1970 -luvulla kuitenkin fosfaattien vesistöihin vapautumisen kielteisten ympäristövaikutusten vuoksi. Sitä käytetään edelleen tahranestoaineena kaupallisessa hammastahnassa, mutta sen lisäksi se auttaa poistamaan hammaskiveä ja plakkia hampaista.
Kalsiumpyrofosfaatti on myös lisäaine hammaslankaan ja hammastahnaan, vaikka tämä kemiallinen yhdiste tunnetaan parhaiten helpottavan niveltulehdusta, jota kutsutaan kalsiumpyrofosfaattikerrostaudiksi (CPDD), koska dihydraattikiteitä kertyy nivelnesteeseen ja niveliä ympäröivään kudokseen. Seurauksena on tulehdus, joka aiheuttaa kipua ja heikentää liikettä. Vaikka tämän taudin tarkka mekanismi ei ole vielä selvä, epäillään, että se voi liittyä kohonneisiin ATP -tasoihin.